在生物制药、蛋白纯化与天然产物分离中，工业级层析柱的运行状态直接影响产品收率、纯度与工艺稳定性。长期使用中常因操作不当、样品污染或填料老化引发各类问题。掌握
工业级层析柱的常见问题诊断与高效解决方法，是确保其正常工作的关键。
1、背压异常升高
检查柱头筛板堵塞或填料压实。尝试反向冲洗（若柱体允许）5–10倍柱体积去离子水，清除颗粒物。检查样品是否未过滤（建议用0.22μm滤膜预处理）。若为硅胶柱，避免使用高pH缓冲液导致溶胶。严重堵塞需拆柱更换筛板或重新装填。
2、柱效下降或峰形拖尾
多因填料污染或沟流所致。执行深度清洗：用1–2MNaCl溶液去除离子吸附；0.5MNaOH冲洗1小时去蛋白残留；70%乙醇循环30分钟杀菌去脂。若仍无效，可能填料已老化，需更换新介质。
3、分离度降低或峰合并
检查上样量是否超载，减少进样体积或浓度。确认流速是否过快，降低至推荐值（如300cm/h）。检查缓冲液pH与电导是否准确，重新配制并校准。若为离子交换柱，检查再生是否完成。
4、填料塌陷或产生气泡
多因干柱或压力骤变引起。严禁排干，保存时始终充满液体。若已干裂，可尝试低流速水化恢复。系统脱气不充分会导致气泡滞留，影响分离。上样前对所有溶液进行脱气处理。
5、柱体泄漏或接口渗液
检查端盖密封圈是否老化、变形或安装不当。更换O型圈，涂抹硅脂增强密封。确认柱体螺纹是否拧紧，但避免过力导致破裂。定期检查高压接头与管路连接。
6、保留时间漂移
多为温度波动或缓冲液成分变化。确保系统恒温（±1℃），避免环境温差。检查泵混合比例是否准确，定期校准。确认柱平衡是否充分（电导与pH稳定），避免批次间差异。
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